การผลิตอินซูลินจากนมโคลนอาร์เจนตินา

แรก อินซูลินเป็นกรดอะมิโนเปปไทด์ 51 ชนิดซึ่งสร้างเป็นกลุ่ม A และ B จำนวน 2 กลุ่ม โซ่ A มี 21 กรดอะมิโนและโซ่ B มีกรดอะมิโน 30 ตัว โซ่ทั้งสองนี้มีการเชื่อมโยงระหว่างกันภายในโดยพันธะภายในและระหว่างซัลไฟด์ การปลดปล่อยฮอร์โมนนี้ส่วนใหญ่จะถูกเรียกโดยระดับน้ำตาลในเลือด [1,2,3] โรคเบาหวาน

การที่ Langerhans 2 เซลล์ไม่สามารถหลั่งอินซูลินได้หลังจากได้รับ glucose เพียงพอหรือไม่สามารถเลือก Diabetes Mellitus ได้ ภาวะแทรกซ้อนของโรคเบาหวาน ได้แก่ การเกิดต้อกระจกความล้มเหลวของไตเรื้อรังเฉียบพลันโรคหัวใจบาดแผลที่ไม่สามารถเยียวยาโรคเหงือกและอื่น ๆ ได้

ภาวะแทรกซ้อนดังกล่าวมีผลกระทบต่อมาตรฐานการครองชีพของผู้คน ประชากรเบาหวานทั่วโลกมีประมาณ 200 ล้านคน ข้อมูลของ WHO แสดงให้เห็นว่าจะมีการเพิ่มขึ้นเป็นสองเท่าภายในปี 2568 (อิงจากข้อมูลปี 2545) ซึ่งหมายความว่าฮอร์โมนนี้มีความสำคัญ

1.3 ประวัติความเป็นมาของอินซูลิน

Baunting and Best ได้พัฒนาการใช้ยาอินซูลินในปีพ. ศ. 2464 อินซูลินเป็นโปรตีนตัวแรกที่ถูกเรียงตามลำดับโดย Frederick Sanger ในทศวรรษที่ 1950 ประมาณ 60 ปีผู้ป่วยโรคเบาหวานขึ้นอยู่กับแหล่งธรรมชาติของอินซูลินและมีปัญหาด้านอุปทานและคุณภาพ ในช่วงปลายทศวรรษ 1970 และต้นปี 1980 เทคโนโลยี DNA recombinant ช่วยให้นักวิทยาศาสตร์สังเคราะห์การสังเคราะห์อินซูลินของแบคทีเรียได้

อินทรียอินซูลินที่สำคัญที่สุดของอินซูลินคืออินซูลินของมนุษย์ซึ่งสามารถแยกได้จากรูปแบบผลึกจากพี่น้องมนุษย์ นี่คือประมาณ ขวดละ 5,000 เหรียญซึ่งเป็นไปไม่ได้ เนื่องจากสถานการณ์อารมณ์ความรู้สึกทางเชื้อชาติและเศรษฐกิจของโรคเบาหวานมีผลกระทบอย่างไม่ใส่ใจซึ่งทำให้นักวิทยาศาสตร์คิดถึงเทคนิคทางเลือกที่ช่วยลดต้นทุนการผลิต โดยการใช้พาหะ plasmid นักวิทยาศาสตร์ผลิตอินซูลินจากอีโคไลอินซูลินด้วยเทคโนโลยี rDNA มีข้อดีและข้อเสียของตัวเอง เวลาในการผลิตต่ำ แต่โอกาสของการปนเปื้อนสูง

2. การผลิตสัตว์ดัดแปรพันธุกรรมมีความซับซ้อนทั้งด้านเทคนิคและปัญหาทางจริยธรรม

2.1 การใช้สัตว์ที่เป็นตัวยีนในการผลิตโปรตีน

สัตว์ที่มีการถ่ายทอดทางพันธุกรรมถูกนำมาใช้เพื่อผลิตโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับมนุษย์ หนึ่งตัวอย่างเช่นการผลิตของเนื้อเยื่อ plasminogen activator (tPA) ในนมแพะ ที่นี่ดีเอ็นเอเข้ารหัสดีเอ็นเอควบคุมสัตว์เลี้ยงลูกด้วยนมและเนื้อเยื่อ activator plasminogen ถูกใช้ในการผลิต rDNA ยีนไฮบริดได้รับการฉีดวัคซีนลงในไข่ที่ปฏิสนธิ (แยกจากแพะ) โดยการทำ microinjection ไข่ที่ปฏิสนธิแล้วจะถูกถ่ายโอนไปยังแม่พยาบาล ต่อจากนี้ยีนที่ผสมด้วยยีนมีความเหมาะสมกับการกลายพันธุ์ของยีนที่ทำให้เกิดการกลายพันธุ์ เทคโนโลยีดัดแปรพันธุกรรมนี้ช่วยให้แพะมี titer ในนมได้ เทคนิคที่คล้ายกันนี้ใช้กับการดัดแปลงเล็ก ๆ ที่วัวผลิตอินซูลินในนม 2.2 Procedure

สัตว์ที่เลือกคือกวางมูซที่รู้จักกันในชื่อการผลิตน้ำนมที่อุดมสมบูรณ์ ทารกในครรภ์ถูกแยกออกจากดีเอ็นเอของทารกในครรภ์ อัตราส่วนโปรตีนดีเอ็นเอในสัตว์และพืชลดลง ดังนั้นเมล็ดจะถูกแยกออกจากกันก่อน นี้จะเพิ่มอัตราส่วนของดีเอ็นเอและโปรตีนและหลีกเลี่ยงการปนเปื้อนดีเอ็นเอโครโมโซมกับดีเอ็นเอจากเซลล์เนื้อเยื่อ cytoplasmic นิวเคลียสที่เปิด RNA และโปรตีนถูกย่อยสลายด้วยเอนไซม์และดีเอ็นเอจะตกตะกอนอินซูลินอินซูลินในการสร้างอินซูลินของมนุษย์จะถูกแยกออกในลักษณะเดียวกัน o ลำดับดีเอ็นเอที่ต้องการเชื่อมโยงกับเอนไซม์ดีเอ็นเอ ligase

o ยีนไฮบริดถูกนำมาใช้โดยการจุลินทรีย์เข้าสู่เซลล์ หลังจากที่ยีนเข้าสู่เซลล์แล้วมันจะต้องเข้าสู่นิวเคลียส

o ต้องมีการถอดเมล็ดไข่ขาวและเมล็ดจะถูกลบออกโดย micropipet

o เมล็ดที่ถูกดัดแปลงพันธุกรรมจะถูกผูกมัดด้วยเทคนิคการโคลนนิ่งกับไข่ในครรภ์

กระตุ้นการแยกตัวของเซลล์และการสร้างตัวอ่อนในระยะเริ่มแรก

o เซลล์ตัวอ่อนถูกแยกออกและปลูกฝังในนมแม่ทดแทน

o สร้างลูกโคที่ได้รับการดัดแปลงพันธุกรรม 4 ตัวใน 385 ± 5 วัน [19659002] o ลูกวัวเหล่านี้ถึง 18 ถึง 24 เดือน วุฒิภาวะที่พวกเขาสามารถผลิตนมได้ หลังจากเตรียมนมแล้วจะได้รับอินซูลินโดยการทำให้บริสุทธิ์และการกลั่นของนมด้วยเทคนิคการทำให้บริสุทธิ์ของโปรตีนเช่น HPLC

– นักวิทยาศาสตร์ได้แยกเซลล์เฉพาะจากทารกในครรภ์ของเจอร์ซีจากโรงฆ่าสัตว์

– rDNA แทรกซึมเข้าไปในนิวเคลียสที่ไปถึงนิวเคลียส

– แกนดัดแปลงพันธุกรรมถูกผสมโดยใช้เทคนิคการโคลนนิ่ง

– แรงกระตุ้นทางไฟฟ้า เริ่มต้นการแบ่งเซลล์

– เซลล์ที่มีลักษณะเฉพาะและสามารถปลูกถ่ายเป็นนมแทนได้ 4 ตัว

– ลูกโคมีการเปลี่ยนแปลงทางพันธุกรรมเกิดมาในแม่โคคลอด 385 ± 5 วัน

– ลูกโคที่ได้รับการดัดแปลงพันธุกรรมถึงวัยผู้ใหญ่ภายใน 18 ถึง 24 เดือน [19659002] – หลังจากเริ่มผลิตนมอินซูลินสามารถหาได้ด้วยการทำให้บริสุทธิ์และปรับสภาพนม ข้อสรุป

o เทคนิคนี้สามารถลดต้นทุนการผลิตได้ถึง 30% o 19659002 o การต่อสู้กับภาวะแทรกซ้อนสามารถทำได้อย่างต่อเนื่อง

o การปฏิวัติการใช้สัตว์ชนิดพันธุ์ผสมเพื่อการผลิตโปรตีนเมื่อมีการแก้ไขปัญหาตามปกติ

ชีววิทยาโมฮัน

(2004) สำนักพิมพ์มหาวิทยาลัยเคมบริดจ์

หลักการเทคโนโลยีชีวภาพแบบโมเลกุลและการประยุกต์ใช้ดีเอ็นเอ Recombinant DNA Bernard R. Glick และ Jack J. Pasternak (19659037) เทคโนโลยีชีวภาพโมเลกุล ]

Source by sbobet